Колко грама IPTG са необходими за приготвяне на концентрация от 1 милимол?

1. Колко IPTG трябва да добавя?
2. Как се изчислява концентрацията на IPTG?
3. Каква концентрация на IPTG се използва за индукция?
4. Можете ли да добавите твърде много IPTG?
5. Колко дълго трае IPTG при 4c?
6. Колко дълго трае IPTG?
7. Кога трябва да се добави IPTG?
8. В какво е разтворен IPTG?
9. Колко време отнема IPTG за индуциране?
10. Колко време е индукцията на IPTG?
11. Как IPTG активира промотора?
12. Може ли IPTG да се метаболизира?
13. Концентрацията на IPTG влияе ли на експресията на протеин?
14. IPTG инхибира ли растежа?

Колко IPTG трябва да добавя?

Типичната крайна концентрация при използване на IPTG за индуциране на експресия на протеин под lac оперон е 0.1 mM IPTG. За директно нанасяне върху плоча с твърда среда, добавете 56 μL от 100 mM IPTG изходен разтвор директно към горната част на плаката и оставете да изсъхне преди инокулиране на плаката.

Как се изчислява концентрацията на IPTG?

Когато се изисква от вас О.д. стойността за културата е достигната, добавете 1mL от този бульон към 1 литър бульонна култура, така че крайната концентрация на IPTG да е 1mM. Това е според формулата C1V1= C2V2 (C: концентрация, V: обем), която вече трябва да използвате като цяло за всички приготовления на разтвори.

Каква концентрация на IPTG се използва за индукция?

IPTG е ефективен индуктор на протеинова експресия в концентрационен диапазон от 100 μM до 1.0 mM. Използваната концентрация зависи от силата на необходимата индукция, както и от генотипа на използваните клетки или плазмид.

Можете ли да добавите твърде много IPTG?

да IPTG спира процеса на разделяне, но подобрява производството на протеин. обаче, ако увеличим IPTG над граница, деленето на бактериите е компрометирано и което от своя страна влияе на протеиновия механизъм на клетките. Да, високата концентрация на IPTG е токсична за клетката.

Колко дълго трае IPTG при 4c?

Когато се съхранява като прах при 4°C или по-ниска, IPTG е стабилен в продължение на 5 години.

Колко дълго трае IPTG?

IPTG е стабилен най-малко 9 месеца, когато се съхранява неотворен при –20°C.

Кога трябва да се добави IPTG?

Във всички протоколи се казва, че преди да индуцирате вашата култура с IPTG, за да експресирате вашия протеин в E. coli трябва да изчакате, докато получите OD от около 0.6. Отнема ви два дни, тъй като трябва да ги отглеждате първо за една нощ и след това да започнете на следващия ден с нисък OD, след което изчакайте, докато достигнете OD 0.6 и др.

В какво е разтворен IPTG?

Разтворете 2.38 g IPTG в 8 mL дестилирана H₂О. Доведете до краен обем от 10 mL с молекулярна биологична степен H₂О. Филтър стерилизирайте с 0.22 μ филтър за спринцовки. Съхранявайте в аликвоти от 1 ml при -20 °C.

Колко време отнема IPTG за индуциране?

Оптималната температура на инкубация и времето за индукция ще варират в зависимост от целевия протеин. Препоръчваме промяна на температурата и времето на индукция за оптимизиране на експресията (37°C за 2-4 часа, 30°C за 4-6 часа, 22-25°C за 6-16 часа и 12-15°C за една нощ, като се използва 0.4 mM IPTG).

Колко време е индукцията на IPTG?

* Времената за въвеждане варират от 2-5 часа. *IPTG може да варира от 0.1-1.0 м. *Ако сварите пробата си твърде дълго, тя ще стане вискозна от пълното освобождаване на клетъчната ДНК. Все още можете да ги използвате, ако можете да намерите област с нисък вискозитет, но обикновено е по-добре просто да повторите експеримента.

Как IPTG активира промотора?

Когато липсва глюкоза и присъства лактоза, алолактозата се свързва с лак репресора, за да го освободи от лактоза оператора. По подобен начин на алолактоза, IPTG предизвиква освобождаването на lac репресора. В резултат на това РНК полимеразата се свързва с промотора и започва генната транскрипция.

Може ли IPTG да се метаболизира?

IPTG е структурна имитация на лактозата (наподобява галактозната захар), която също се свързва с lac репресора и предизвиква подобна конформационна промяна, която значително намалява афинитета му към ДНК. За разлика от лактозата, IPTG не е част от никакви метаболитни пътища и така няма да бъде разграден или използван от клетката.

Концентрацията на IPTG влияе ли на експресията на протеин?

Нивото на генна транскрипция може да се регулира чрез използване на подходяща концентрация на IPTG индуктор. ... По-високите концентрации на IPTG увеличават количеството протеин в неразтворимата фракция поради повишената скорост на експресия. Той заключи, че концентрацията на IPTG влияе върху скоростта на експресия на претромбин-2.

IPTG инхибира ли растежа?

Инхибиращият растежа ефект на антисенс експресията на yidC върху бактериални клетки беше изследван чрез оценка на клетъчния растеж (Фигури 1 и 2). Фигура 1 показва, че добавянето на IPTG има ясен инхибиращ ефект върху растежа на yidC и murA антисенс, експресиращ E. coli DH5 a клетки поради заглушаване на гени, необходими за растежа.