Защо BL21 клетките се използват в експресията?

Компетентните клетки BL21(DE3)pLysS осигуряват по-строг контрол на експресията на протеини за експресия на токсични протеини и са устойчиви на хлорамфеникол. Когато се използват с бактериофаг СЕ6, клетките BL21 осигуряват най-строг контрол на експресията на протеини (вижте BL21(DE3) Щамове и протеинова токсичност).

1. Каква е целта на използването на IPTG?
2. Защо използваме BL21 за протеинова експресия?
3. Защо трябва да използваме BL21 DE3, а не BL21 клетки за експресия с IPTG?
4. Какво означава DE3?
5. Как IPTG предизвиква експресия?
6. Защо IPTG се добавя към културата?
7. Какви са причините, поради които Escherichia coli е един от предпочитаните организми за производството на рекомбинантни протеини?
8. Каква е разликата между dh5alpha и BL21?
9. Какво е толкова специалното за Escherichia coli BL21 DE3 и BL21?
10. Какво е предимството от използването на щамове BL21 и BL21 DE3, които имат дефицит на Lon протеазата и нямат протеаза на външната мембрана OmpT?
11. Защо щамът BL21 DE3 E coli е добър щам за свръхекспресия?
12. Каква е целта на използването на Iptg в експеримента с lac оперон?
13. Какво е pLysS плазмид?
14. Какво е Т7 промотор?
15. Какво е Lambda DE3 Lysogen?

Каква е целта на използването на IPTG?

IPTG, известен официално като изопропил-β-D-тиогалактопиранозид, е реагент, който обикновено се използва в молекулярната биология. Той функционира като индуктор на галактозидазна активност чрез свързване и инхибиране на репресора. Използва се за индуциране на експресия от lac промотора и производните.

Защо използваме BL21 за протеинова експресия?

Компетентните клетки BL21(DE3)pLysS и компетентните клетки за еднократна употреба BL21(DE3)pLysS позволяват високоефективна протеинова експресия на всеки ген, който е под контрола на Т7 промотор. Щамът носи както DE3 лизогена, така и плазмида pLysS. ... Висока протеинова експресия се постига чрез добавяне на IPTG.

Защо трябва да използваме BL21 DE3, а не BL21 клетки за експресия с IPTG?

IPTG е необходим за максимално индуциране на експресия на Т7 РНК полимераза, за да се експресират рекомбинантни гени, клонирани надолу по веригата от Т7 промотор. BL21(DE3) е подходящ за експресия от T7 или T7-lac промотор или промотори, разпознати от E.

Какво означава DE3?

Означението DE3 означава, че съответните щамове съдържат λDE3 лизоген, който носи гена за Т7 РНК полимераза под контрола на lacUV5 промотора. IPTG е необходим за максимално индуциране на експресия на Т7 РНК полимераза, за да се експресират рекомбинантни гени, клонирани надолу по веригата от Т7 промотор.

Как IPTG предизвиква експресия?

IPTG или Isopropyl β-D-1-тиогалактопиранозид е химичен реагент, имитиращ алолактоза, който премахва репресор от lac оперона, за да индуцира генна експресия. ... Той действа като индуктор за иницииране на транскрипцията на гени в lac оперона.

Защо IPTG се добавя към културата?

[реакция: виж текста] Добавянето на изопропил-бета-d-тиогалактопиранозид (IPTG) към бактериални култури често се използва за индуциране на експресия на базирани на плазми гени за производството на рекомбинантни протеини под контрола на lac промотора, но прост метод за заобикаляне на присъщата нестабилност на това съединение не е ...

Какви са причините, поради които Escherichia coli е един от предпочитаните организми за производството на рекомбинантни протеини?

Е. coli е предпочитан гостоприемник за клониране на гени поради високата ефективност на въвеждане на ДНК молекули в клетките. Е. coli е предпочитан гостоприемник за производство на протеин поради бързия му растеж и способността да експресира протеини на много високи нива.

Каква е разликата между dh5alpha и BL21?

Ключовата разлика между BL21 и DH5 Alpha е, че BL21 е с дефицит на протеаза, генетично модифициран компетентен E. coli клетка, използвана предимно за експресия на протеини, докато DH5 Alpha е генно инженерно компетентен E. coli клетка с recA1 мутация, използвана предимно за плазмидна трансформация.

Какво е толкова специалното за Escherichia coli BL21 DE3 и BL21?

Escherichia coli BL21 и BL21(DE3), създадени от F. ... Е. coli BL21(DE3), производно на BL21, е може би най-широко използваният при експресия на високо ниво на рекомбинантни протеини и съдържа профаг DE3, получен от бактериофаг λ, който носи гена на Т7 РНК полимераза под контрола на lacUV5 промотор.

Какво е предимството от използването на щамове BL21 и BL21 DE3, които имат дефицит на Lon протеазата и нямат протеаза на външната мембрана OmpT?

BL21(DE3) е E. coli B щам и не съдържа lon протеазата. Освен това има дефицит на протеаза на външната мембрана OmpT. Липсата на тези две ключови протеази намалява разграждането на хетероложните протеини, експресирани в клетките.

Защо щамът BL21 DE3 E coli е добър щам за свръхекспресия?

coli щамове: BL21(DE3), C41(DE3) и T7 express. ... Този дизайн позволява контролирана индукция на полимеразата и следователно индуцируем контрол на транскрипцията на гени надолу по веригата от Т7 промотора. Тази система осигурява потенциални предимства пред щамове, които носят Т7 РНК полимераза върху лизогенен профаг DE3.

Каква е целта на използването на Iptg в експеримента с lac оперон?

IPTG (изопропил ß-D-1-тиогалактопиранозид) е молекулярно-биологичен реагент. Това съединение е молекулярна имитация на алолактоза, лактозен метаболит, който задейства транскрипцията на lac оперона и следователно се използва за индуциране на протеинова експресия, когато генът е под контрола на lac оператора.

Какво е pLysS плазмид?

pLysS и pLysE са 4886bp плазмиди, конструирани чрез вмъкване на Т7 лизозимен ген в BamH I мястото на pACYC184 (1). Тези плазмиди не са клониращи вектори; те се използват в λDE3 лизогенни гостоприемници за потискане на базалната експресия от Т7 промотора чрез производство на Т7 лизозим, естествен инхибитор на Т7 РНК полимераза.

Какво е Т7 промотор?

Какво представлява T7 промоторната последователност? Т7 промоторът е последователност от ДНК 18 базови двойки дълги до началното място на транскрипцията при +1 (5' – TAATACGACTCACTATAG – 3'), която се разпознава от Т7 РНК полимераза¹ .

Какво е Lambda DE3 Lysogen?

ламбда DE3 е фагова конструкция, която експресира Т7 РНК полимераза под контрола на lacUV5 промотор. ... Лизогените на DE3 са направени с помощта на хелперен фаг с хетероложен имунитет. Мутацията на int също трябва да предотврати нормалното изрязване от лизогени.